蛋白酶k在bse的检测中用来消化prpc,用来区别致病的prpsc,它的正确使用对检测特异性和敏感性都有重要影响。
概述: 蛋白酶k是一种非特异性、枯草杆菌蛋白酶相关的丝氨酸蛋白酶, 具有很高的比活性。edta等鳌合剂或sds等去垢剂不能使蛋白酶k失活, 该酶在较广的ph范围内(ph 4-12.5)均有活性
来源: 源于白色念球菌(tritirachium album)
反应条件: 蛋白酶k在较广的缓冲液ph范围(ph 4-12.5), 温度范围(37-60℃), 盐浓度(如: 3 m guhcl)或尿素(4 m)条件下均有活性。在一些去污剂如: tween20(5%), triton x-100 (1%)和sds(1%)条件下也有活性
比活性: 30 units/mg
分子量: 28.9 kda
单位定义: 在250 μl反应体系, 37℃条件下1分钟内能分解释放相当于1 μmol酪氨酸的folin-阳性氨基酸和肽所需要的蛋白酶k的量定义为一个单位(1)
贮存条件: 20 mm tris-hcl (ph 7.4), 1 mm cacl2和50%甘油。贮存于-20℃
proteinase k，中文名为蛋白酶k。不含dnase，不含rnase，进口分装，可直接使用。可以用于消化各种蛋白。用于各种常见的分子生物学、细胞生物学等相关实验，例如基因组dna抽提、酶的消化去除等。
酶活力，>30u/mg。在37℃，以血红蛋白为底物，1分钟内可以产生相当于1微摩尔酪氨酸folin阳性的氨基酸或多肽的蛋白酶k的量，定义为一个单位蛋白酶k酶活力。在很宽的ph范围内有-效，有-效的ph范围为ph4.0-12.5，蕞-佳ph范围为ph7.5-8.0。
蛋白酶k的蕞-佳反应温度为65℃，但在65℃或更高的温度蛋白酶k自身的也非常迅速地降解。很多时候反应温度选择50-55℃。在0.2-1%sds或约10mm尿素存在的情况下，蛋白酶k显示更高的酶活性。蛋白酶k的常用工作浓度为0.05-1mg/ml，根据所用缓冲液是否含有sds、尿素、ph是否适合、温度是否适合等因素确定具体的工作浓度。常用浓度的edta、triton x-100、tween 20、sarkosyl、盐酸胍对蛋白酶k的活力影响不大。